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鼠李糖苷酶 食品級 酶制劑 西安達(dá)爾聞 可定制酶活力

α- L-鼠李糖苷酶催化機(jī)制

GH家族的酶可以通過構(gòu)型翻轉(zhuǎn)(Inverting)機(jī)制水解底物中的糖苷鍵^[8]，在水解反應(yīng)中，多數(shù)鼠李糖苷酶由酸性氨基酸行使催化作用，例如天冬氨酸和谷氨酸^[9]。以鼠李糖苷酶SaRha78A水解糖苷鍵的過程為例(圖 1)，底物鼠李糖的O1是易被攻擊的位置，鼠李糖苷酶SaRha78A的氨基酸Glu⁶³⁶為該酶的催化質(zhì)子供體，可以使底物鼠李糖中的O1發(fā)生質(zhì)子化，另外，與底物鼠李糖的O1和鼠李糖苷酶SaRha78A的Glu⁸⁹⁵有強(qiáng)氫鍵作用的水分子被氨基酸Glu⁸⁹⁵去質(zhì)子化，去質(zhì)子化的水分子攻擊底物中的糖苷鍵，從而完成水解反應(yīng)^[9]。序列比對和同源建模結(jié)果顯示，α-L-鼠李糖苷酶的活性位點(diǎn)相對保守^{[8, 10, 12]}，在BsRhaB蛋白序列中，與SaRha78A的Glu⁶³⁶和Glu⁸⁹⁵相對應(yīng)的保守氨基酸是Glu⁵⁷²和Glu⁸⁴¹。Cui等將BsRhaB的Glu⁵⁷²和Glu⁸⁴¹突變?yōu)楣劝滨０泛竺富?，證明了Glu⁵⁷²和Glu⁸⁴¹對該酶催化活性的重要性^[8]。同樣的，BT0986中的Glu⁴⁶¹和Glu⁵⁹³也被推測為典型的催化殘基^[11]。